重组蛋白服务

为什么您应该选择我们的蛋白质表达和纯化服务

自2006年以来，我们一直利用定制生产的蛋白质推动研究取得成功，并期待提供高质量的蛋白质来帮助您实现研究目标。

RayBiotech的蛋白质生产服务有:

○ 全面——我们可以为您提供从基因合成到蛋白质纯化等各个方面的帮助。我们的服务包括脱盐、等分、冻干和结合。

○ 快速——您将在3周内获得细菌表达的蛋白质，在6-8周内获得昆虫表达的蛋白质，在3-6周内获得哺乳动物表达的蛋白质。

○ 易于扩展——首次纯化蛋白质后，我们可以根据需求扩大培养以获得您所需要的蛋白量。

○ 高品质——纯度经SDS-PAGE测定，我们通常达到>95%的纯度。

○ 无风险——我们分阶段推进项目。您将收到每个阶段的进展通知。您只需为成功完成的里程碑付费。

○ 价格实惠。

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准备好让我们开始开发您的重组蛋白服务了吗？

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我们提供一系列蛋白质表达系统来支持不同的研究需求

	细菌	昆虫细胞 (杆状病毒)	动物细胞 (TruExp™)
概况	细菌基因表达是一种快速且经济高效的生产重组蛋白的方法。	杆状病毒昆虫细胞基因表达易于从实验室扩大到大规模生产系统。然而，尽管表达的蛋白质具有丰富的PTM，但修饰的类型和模式与在哺乳动物系统中表达相同蛋白质时所见的不同。	哺乳动物基因表达是产生哺乳动物蛋白质天然构象和PTM的最佳选择。
细胞类型	E. Coli	Sf9, HighFive	TruExp™ 哺乳动物表达系统(基于Human HEK293 suspension cells)
表达水平	低-中-高	低-高	低-中-高
细胞增殖速度	快 (30 mins)	慢 (18-24 hr)	慢 (24 hr)
费用	$	$ - $$$	$ - $$$
耗时	3 周	6 - 8 周	3 - 6 周
翻译后修饰
蛋白折叠	Not reliable	Reliable	Reliable
糖基化	No	Simple	Complex
磷酸化	No	Yes	Yes
乙酰化	No	Yes	Yes
酰化	No	Yes	Yes
γ-羧基化	No	No	Yes

见证我们专有的TruExp™哺乳动物细胞基因表达系统的强大功能。

TruExp^™ 是RayBiotech最先进的哺乳动物细胞表达系统，用于生产具有天然构象和PTM的重组蛋白。 TruExp^™ 对于高分子量或难以表达的蛋白质来说，是一个很好的选择。

我们推荐用 TruExp^™ 哺乳动物基因表达系统助您达成下列目标:

分泌型表达—表达的蛋白质分泌到培养基中（图1），这有助于实现高纯度水平（图2）；与从高度污染的裂解液中回收蛋白质相比，这种方法更为优越。
复杂，包含丰富PTM的表达—例如，丰富的糖基化对于赋予蛋白质功能至关重要（图3）。
高表达量—典型的产量范围是每升培养液可纯化2-355毫克蛋白质（表2）。
无生物危害风险—无血清培养基和无动物源材料的使用消除了生物危害风险。

图1. TruExp哺乳动物细胞基因表达系统提供高水平的蛋白质表达。六个不同的人类基因（H1-6）和三个小鼠基因（M1-3）通过TruExp表达系统进行了表达。将细胞培养上清液（10 µL）应用于12% SDS-PAGE (A) 并通过抗His标签单克隆抗体进行Western blot检测 (B)。除了基因H6和M2外，所有过表达的基因均显示出额外的分泌蛋白条带 (A, 红色箭头)。所有基因均得到表达，部分显示了丰富的翻译后修饰，表现为与预测大小相比分子量增加 (B, 黄色箭头)。M = 蛋白标准标记物 (kDa)。

图2. 在TruExp哺乳动物细胞基因表达系统中表达的蛋白质是全长且高度纯化的。从转染哺乳动物细胞培养上清液中亲和纯化的重组蛋白显示出高纯度及完整的蛋白条带，即使在分子量大于100 kDa的情况下也是如此。M = 蛋白标准标记物 (kDa)。

Deglycosylation recombinant proteins analysis

图3. TruExp哺乳动物细胞基因表达系统中纯化的重组蛋白的去糖基化分析。相同量的纯化蛋白未经处理（第2道）或在天然条件（第3道）或还原条件（第4道）下用去糖基化酶处理。去糖基化处理导致蛋白质迁移率发生变化，产生了一个预期大小的单一降低条带，这表明未经处理的重组蛋白（第2道）是被糖基化的。第1道：蛋白标准标记物 (kDa)。第2道：未处理的蛋白。第3道：在天然条件下用去糖基化酶处理的蛋白。第4道：在变性条件下用去糖基化酶处理的蛋白。第5道：相同的切割反应，但未加入蛋白。

表 2. RayBiotech TruExp哺乳动物细胞基因表达系统典型的重组人蛋白产量如下：

Protein Abbreviated	Protein Name	Yield (mg/L culture)
SCCA2	Serpin B4, Serpin Peptidase Inhibitor	335.7
Has	Human serum albumin	330
CT	Calcitonin	160.8
YWHAE	14-3-3 Protein Epsilon	103.1
NT-proBNP	N-terminal of the prohormone BNP	99.5
NGAL	Lipocalin-2	69.1
AFP	a-Fetoprotein	63.2
BNP-32	Brain natriuretic peptide 32	51.2
UBQN	Ubiquilin-1	41.3
CEA	Carcinoembryonic Antigen	39.8
erbB-3	Receptor Tyrosine-Protein Kinase erb-3	37.5
EGFR	Epidermal Growth Factor Receptor	23.5
PGC	Pepsinogen II, Pepsinogen C	18.6
LAG-3	Lymphocyte Activation Gene 3 Protein	16.9
Erb/Her2	Receptor Tyrosine-Protein Kinase erbB-2	16.7
HGF R	Hepatocyte Growth Factor Receptor	14.6
ANXA2	Annexin A2	11.8
GP73	Golgi Membrane Protein 1	5.5

常见问题解答还有疑问吗？联系我们

我可以用自己的表达载体么？??

是的。如果您已经使用您的表达载体成功表达了目标蛋白，请提供您希望我们使用的表达条件。这样我们可以直接进入第4阶段。如果您尚未确认该基因在您的表达载体中能够表达，我们将在第3阶段进行一个小规模的表达测试。。

我的目标基因已经存在于质粒中。基因可以转移到你的表达载体中吗？

这取决于具体情况。请提供您的基因序列以及至少在5'端和3'端各100个核苷酸的侧翼序列。这些信息是必需的，因为我们将会使用限制性内切酶将基因从您的质粒中切割出来，并将其连接到我们的表达载体中（即克隆）。如果我们能够将您的基因克隆到我们的载体中，那么第1阶段就可以省略。如果基因及其侧翼序列与任何限制性酶切方法不兼容，那么我们将无法使用您的基因，并需要从第1阶段开始。此外，还需要考虑您的基因是否已经针对表达系统进行了密码子优化。

我可以不要His标签换其他标签或者完全去除标签么？

这两个问题的答案都是“是的”。对于第一个问题，可以在下单时向我们说明你想要的标签。对于第二个问题，我们可以在标签和目标蛋白之间添加一个切割位点。例如，我们可以在His标签和感兴趣的蛋白之间加入烟草蚀刻病毒（TEV）酶切位点。在His标签蛋白被纯化后，可以加入His标签的蛋白酶，将His标签从目标蛋白上切割下来。随后，无标签的目标蛋白可以通过金属螯合亲和层析（IMAC）从His标签和His标签的TEV蛋白酶中进一步纯化出来。